Наибольший интерес для дальнейшего изучения и выделения индивидуальных компонентов, обладающих антимикробным действием, являются эфирные масла иссопа крупкоцветкового, тимьяна обыкновенного, тимьяна Дмитриева, тимьяна сибирского, можжевельника вирджинского, можжевельника Саржента, пижмы улытауской, тимьяна розового, обладающие выраженным антибактериальным действием по отношению к грамположительным штаммам (St. аureus, Baс. subtilis). Также образцы эфирных масел, тимьяна Дмитриева, тимьяна обыкновенного, тимьяна сибирского проявившие в отношении к грамотрицательной бактерии (E. сoli) выраженную антибактериальную активность.

Антибактериальное действие представленных эфирных масел в отношении к Ps.aeruginosa слабо выражена. Эфирное масло тимьяна обыкновенного проявляют умеренно-выраженное антибактериальное действие в отношении к данному тест-штамму. Фунгицидное действие по отношению к дрожжевому грибу С. albicans проявили образцы эфирных масел тимьяна обыкновенного, тимьяна Дмитриева, тимьяна сибирского, можжевельника вирджинского, можжевельника Саржента.

Биологически активные эфирные масла полыни гладкой, полыни тонковойлочной, Филатовой, живицы сосновой, оксима циклоартемизиа кетона защищены патентами предпатентами РК [1-4] .

Противогрибковая активность эфирных масел

В лаборатории биоскрининга МНПХ «Фитохимия» испытаны образцы эфирных масел, монотерпеноидов (компоненты эфирных масел) и их производных на противогрибковую активность по отношению к грибам Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Trichophyton mentagraphytos, Epidermophyton fioccosum, Penicillium citrinum методом дисков.

В результате антигрибкового исследования установлено, что все представленные образцы в основном проявляют слабую активность за исключением эфирных масел зизифоры средней и можжевельника ложноказачьего, которые вообще не проявили противогрибкового действия.

Анальгетическая активность эфирных масел

Исследования по изучению анальгетической активности 26 образцов эфирных масел, монотерпеноидов из них и их производных проведены на модели «уксусных корчей».

В ходе исследования установлено, что эфирное масло котовника украинского в дозе 50 мг/кг обладает анальгетической активностью, ингибируя уксусные «корчи» на 85%, превосходя препарат сравнения анальгин (ингибирование составило 65%). Остальные исследуемые образцы эфирных масел в дозах 25 и 50 мг/кг не обладают обезболивающим эффектом, так как ингибирования «корчей» при их применении не происходит.

Антивирусная активность эфирных масел полыни гладкой, аянии кустарничковой и 1,8-цинеола

Эфирные масла обладают высокой антивирусной активностью, обусловленной их непосредственным действием на вирус и индуциировании образования интерферона. Определение противовирусного действия эфирного масла аянии кустарничковой (ЭМАК) проведено на 3–х культурах клеток человека: ФЛЭЧ (фибробласты легких эмбриона человека), J-96 (клетки, полученные из крови мужчины, больного подострой моноцитарной лейкемией), L-41 (клон линии J-96), выращенных в ростовой среде до образования монослоя.

Установлено, что эфирное масло аянии кустарничковой индуциирует синтез ИФН в титрах 64 (Ед/мл) для клеток ФЛЭЧ, 4 (Ед/мл) – для клеток J-96 и 8 (Ед/мл) для клеток L-41 обладает определенной антивирусной и ИФН-индуциирующей активностью in vitro при средне-высокой инфицирующей дозе вируса в диапазоне концентраций, которые задерживали цитопатогенное действие вируса не менее чем на 50% при средне-высокой инфицирующей дозе вируса 10 ТЦД-50/мл, но не при стандартной дозе -100 ТЦД-50/мл: 500-1000 (мкг/мл) для J-96, 250-1000 (мкг/мл), (возможно 30-60(мкг/мл) и 4-15(мкг/мл) для L-41, 125-500 (мкг/мл), (возможно 30-60(мкг/мл) и 4-15(мкг/мл) для ФЛЭЧ.

При изучении влияния различных концентраций эфирного масла полыни гладкой (ЭМПГ) и 1,3,3-триметил-2-оксабицикло[2.2.2]октан (1,8-цинеола) на вирус болезни Ньюкасла (штамм La Sota) и вирус гриппа (штамм A/FPV/Rostock/34) в куриных эмбрионах установлено, что 1,3,3-триметил-2-оксабицикло[2.2.2]октан в концентрации 100 мкМ проявляет 40%-ную ингибирующую активность по отношению к вирусу болезни Ньюкасла .

Экспериментально установлено, что эфирное масло полыни гладкой, в диапазоне исследуемых концентраций 5 - 100 мкМ, проявляет 40%-ную ингибирующую активность по отношению к вирусу болезни Ньюкасла, причем ингибирующая способность препарата не зависит от концентрации. Таким образом, антивирусная активность эфирного масла полыни гладкой сопоставима с активностью коммерческого препарата “Ремантадин”.

Эфирное масло показало выраженную ингибирующую активность по отношению к вирусу гриппа во всем диапазоне исследуемых концентраций (5-100 мкМ) и полностью (100%) подавляло репродукцию вируса.

Противотуберкулезная активность эфирных масел

Исследование противотуберкулезной активности эфирных масел на микобактерии человеческого вида (H37RV и мультирезистентной к лекарственным средствам культуры) показало, что бактериостатической активностью обладали все 11 образцов эфирных масел до 50 дня после посева [5-6]. Так, к микобактериям бычьего и птичьего видов туберкулостатической активностью обладает одно масло – эфирное масло полыни Филатовой, к микобактериям человеческого вида – все исследованные 11 образцов эфирных масел. У двух образцов эфирного масла полыни Филатовой и эфирного масла полыни Сиверса бактериостатическая активность оказалась ниже, чем у других, по отношению к H37RV (чувствительной к лекарственным средствам) и такой же, как и у остальных масел по отношению к устойчивой к лекарственным препаратам культуре человеческого вида микобактерий (полевому штамму).

В результате исследования выявлено, что практически все образцы эфирных масел проявляют слабую и умеренно - выраженную антимикробную активность к грамположительным штаммам (St. аureus, Baс. subtilis) и грамотрицательным штаммам (E. Сoli, Ps. aeruginosa).

Биологически активное эфирное масло полыни Филатовой защищено предварительным патентом РК [2].

Цитотоксическая активность эфирных масел

Изучено влияние следующих эфирных масел, монотерпеноидов и их производных на личинки морских рачков Artemia salina (Leach) в условиях культивирования in vitro для выявления потенциала цитотоксической активности. Ранжир цитотоксической активности, исходя из половинной токсической дозы LD50, выраженной в мкг/мл, выглядит следующим образом: п-Цимол, циклоартемизиакетон и эфирные масла зизифоры Бунге и можжевельника казацкого не обладают цитотоксической активностью в отношении личинок морского рачка Artemia salina.

При этом эфирные масла иссопа крупкоцветковго, тимьяна обыкновенного, тимьяна Дмитриева, пижмы улутавской, тимьяна частолистого обладают выраженной цитотоксической активностью и являются перспективными соединениями для разработки на их основе цитотоксического, противоопухолевого препарата. Остальные образцы эфирных масел проявляют умеренную цитотоксическую активность. Выраженной цитотоксической активностью в ряду исследованных монотерпеноидов и их производных обладают компоненты эфирных масел сабинол и сабинилацетат.

Установлено, что эфирное масло аянии кустарничковой при исследовании цитотоксичности только в разведениях ½ и ¼ проявляет цитотоксический эффект в отношении клеток монослоя только линии ФЛЭЧ, в последующих разведениях эффект сопоставим с контролем, цитотоксического эффекта не наблюдается.

Противовоспалительная активность эфирного масла аянии кустарничковой

Антиэкссудативную активность ЭМАК изучали на моделях асептического воспаления – гистаминового и агарового отека. Воспалительный отек моделировали субплантарным введением в заднюю лапу крыс по 0,1 мл 0,1 %-ного раствора гистамина и 0,1 мл 2 %-ого раствора агара. Эксперименты проводили на белых беспородных лабораторных крысах обоего пола, массой 180-220 г. В качестве препарата сравнения применяли Диклофенак в дозе 25 мг/кг. Животные контрольной группы получали подсолнечное масло в эквиобъемном количестве.

ЭМАК на модели гистаминового отека изучали в дозах 100 и 250 мг/кг. Динамику объема отека регистрировали через 15, 45 и 90 мин после введения гистамина. На модели агарового отека противовоспалительную активность эфирного масла изучали в дозах 100, 200 и 400 мг/кг. Объем отека регистрировали через 1, 3, 4 и 6 часов после введения агарового раствора, а также далее через 20 и 24 часа.

Экспериментальные данные обработали методом вариационной выборки и вычислением средней арифметической и среднего квадратического отклонения. Сравнения результатов исследования с контрольной группой и группы сравнения проведены по критерию Стьюдента с помощью персонального компьютера с применением статистических программ.

При изучении антиэкссудативного действия на модели гистаминового отека установлено, что эфирное масло аянии кустарничковой в дозе 100 мг/кг ингибирует развитие отека через 15 и 45 мин на 39-46 %. В опытной группе, где применяли ЭМАК в дозе 250 мг/кг через 15 и 45 мин наблюдалось подавление экссудации наблюдали на 13-44 % соответственно. Препарат сравнения Диклофенак в дозе 25 мг/кг в течение 45 минут ингибировал развитие отека на 18 %.

В опытных группах и в группе сравнения через 15 мин уже отмечается заметное уменьшение экссудативного отека, когда в контрольной группе увеличение экссудативного отека продолжается. В контрольной группе уменьшение отека наблюдается через 90 минут. Через 90 мин после введения гистамина антиэкссудативный эффект ЭМАК в исследуемых дозах составил 43-46 %.

Результаты исследования показывают, что эфирное масло аянии кустарничковой эффективно действует в ранние стадии развития воспаления, свидетельствуя об его влиянии на активность медиаторов, в частности, гистамина на стадиях высвобождения, инактивации, связывания.

На модели агарового отека эфирное масло аянии кустарничковой в дозах 200 и 400 мг/кг проявило выраженную антиэкссудативную активность. Результаты наблюдения показали, что ЭМАК действует на ранние стадии воспаления: уже через 1 час после введения флогогенного агента данное эфирное масло ингибировало развитие экссудативного отека на 30-47 %. При этом наибольший эффект отмечен для ЭМАК в дозе 200 мг/кг. Через 3 часа наблюдения в данной группе ингибирующий антиэкссудативный эффект достиг 67 %. ЭМАК в исследуемых дозах 100-400 мг/кг через 4 часа ингибировало развитие воспалительного отека на 26-44 %. Препарат сравнения диклофенак в дозе 25 мг/кг в течение 4 часов предотвратил развитие экссудации на 40-43 %, что было сопоставимо с эффектом эфирного масла.

Таким образом, в результате исследований выявлено, что эфирное масло аянии проявляет противовоспалительный эффект в дозах 100 мг/кг и выше. Выраженную активность регистрировали при его применении в дозе 200 мг/кг.

Основные результаты по клиническим испытаниям нового фитопрепарата «Эферол»

«Эферол» представляет собой 10% спиртовый раствор эфирного масла полыни гладкой для ингаляций 25 мл во флаконе-капельнице [7].

Клинические испытания нового фитопрепарата «Эферол» утверждены Фармакологическим комитетом Республики Казахстан (протокол № 79 от 14.11.02) по проведению на базе стационара Института физиологии и гигиены труда (г.Караганда). В 1 фазе пролечено– 32 пациентов (20 больных с пылевым бронхитом, 12 здоровых), во 2 фазе – 98 пациентов (77 больных с пневмоний и 21 больной с хроническим гнойным бронхитом).

При лечении «Эферолом» больных с хроническими пылевыми бронхитами выявлена положительная динамика, а именно: отмечается снижение лейкоцитов в периферической крови, активация лимфоцитарного звена, отсутствие изменений со стороны эозинофилов указывает на то, что отсутствуют сенсибилизация на вводимый препарат. После применения «Эферола» в мокроте отмечается уменьшение высеваемости бактериальной флоры, при этом на дрожжи «Эферол» действует стерилизующе.

Также эфирное масло полыни гладкой полностью подавляло репродукцию вируса. Оно обладает выраженными антиэкссудативными свойствами. Противовоспалительное действие связано как с ингибированием биосинтеза некоторых медиаторов воспаления, обусловленного наличием 1,8-цинеола, так и с другими механизмами, например антимедиаторными (в частности, антигистаминными) свойствами. Наличие антибактериального, противогрибкового и антивирусного действия эфирного масла полыни гладкой позволяет использовать его в качестве потенциального средства для лечения патологии дыхательных путей. Кроме того, это эфирное масло обладает слабыми раздражающими свойствами и не оказывает негативного действия на слизистые оболочки [8-10].

Показания к применению: неспецифические заболевания легких, острый ринит, синусит, ларингит, бронхит, грибковые заболевания дыхательных путей [11].

Эффективность ингаляции «Эферола» в комплексном лечении туберкулеза

Оценку клинической эффективности действия препарата «Эферол» (20% спиртовый раствор эфирного масла полыни гладкой) проводили у больных имеющих выраженные симптомы интоксикации с кашлем и выделением слизисто-гнойной мокроты, стойким бактериовыделением и деструктивными формами туберкулеза. Ингаляции осуществляли 5 раз в неделю ингалятором Муссон. Продолжительность ингаляций составляла 10 мин. Курс лечения составлял 1-2 месяцев. Больные применяли препарат «Эферол» в виде ингаляции в дозе 8 капель 1 раз в день – 144 мг (1 капля – 18 мг). Дизайн протокола лечения включал основной курс стандартной терапии (I, II и IV категории). Наблюдение проводилось до прекращение бактериовыделения.

Проведенные исследования основываются на результатах обследования и лечения 94 больных с легочным туберкулезом, которые находились на стационарном лечении в Карагандинском областном противотуберкулезном диспансере. Больные были разделены на 2 группы. 1-ю (основную) группу составили 49 больных, применявших ингаляцию препарата «Эферол» наряду с противотуберкулезными препаратами. Во 2 (контрольную) группу вошли 45 больных, которые получали противотуберкулезные препараты без препарата «Эферол».

Ингаляция «Эферола» назначалась 34 больным I категории, 8 больным II категории и 7 больным IV категории в течение первых трех месяцев интенсивной фазы. В контрольной группе режимы химотерапии практически не отличались от основной группы (I категория – 32 больных, II категория – 7 больных, IV категория – 6 больных).

В результате лечения ингаляциями препарата «Эферол» через 3-5 дней у большинства больных уменьшилась одышка, кашель, выделение мокроты. После завершения лечения клинические симптомы туберкулезной интоксикации исчезли у 46 больных (93,9±3,4%), в контрольной группе симптомы исчезли у 36 больных (80,0±6,0%).

При сравнительном анализе эффективности лечения основное внимание уделялось срокам прекращения бактериовыделение на основе данных микроскопии мокроты. Как видно из рисунка, бактериовыделение после проведенного курса лечения в 1-ой группе прекратилось в 91,8±3,9% случаях, из них у 79,6±5,8% микобактерии туберкулеза в мокроте не обнаружено через 3 месяца от начала лечения. Продолжение бактериовыделения у 8,2% было обусловлено нарушением режима лечения, хроническим течением процесса и наличием множественной лекарственной устойчивостью. У больных 2-ой группы прекращение бактериовыделение отмечено в 73,3±6,6% случаях (различие между группами достоверно р<0,05), за 3 месяца лечения конверсия мазка наступила у 64,4±7,1% больных.

Инволюция локальных изменений в легких у больных обеих групп шла замедленными темпами ввиду распространенности кавеозно-деструктивных изменений. Несмотря на это, рассасывание инфильтрации и очагов обсеменения со значительным уменьшением полостей распада достоверно чаще встречалось в основной группе - 44,9±7,1%, в контрольной группе, наоборот, преобладало отсутствие положительной динамики - 26,7±6,6%.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что, включение ингаляции препарата «Эферол» в комплексное лечение туберкулеза существенно повышает эффективность противотуберкулезной терапии, особенно у больных с множественной лекарственной устойчивостью [11].

Основные результаты по клиническим испытаниям нового фитопрепарата «Дарменин»

«Дарменин» представляет собой мазь на основе эфирного масла полыни цитварной [12].

Клинические испытания нового фитопрепарата «Дарменин» утверждены Фармакологическим комитетом Республики Казахстан (протокол № 79 от 14.11.02). В 1 фазе пролечено–40 пациентов (по 10 больных с эпидермофитией стоп, интертригинозной формой, кандидозом кисти, микотической экземой).

Препарат обладает широким спектром фармакологического действия, обусловленного составом эфирного масла полыни цитварной. Мазь «Дарменин» ингибирует развитие воспалительного отека, оказывая антиэкссудативное действие. Обладает противогрибковым действием в отношении дерматомикозов кожи (эпидермофитии, кожный кандидоз). Противовоспалительные, ранозаживляющие и антибактериальные свойства препарата способствуют быстрой регенерации поврежденных кожных и слизистых покровов, препятствуя инфицированию раневой поверхности. Мазевая основа препарата обеспечивает быстрое высвобождение эфирного масла и всасывание с места нанесения мази [13].

Основные результаты по доклиническим испытаниям нового фитопрепарата ранозаживляющего действия на основе эфирного масла аянии кустарничковой (ЭМАК)

Сроки заживления резаной кожной раны при применении мазевых форм ЭМАК на жировой и гидрофильной основах показывают, что средние сроки заживления ран при использовании мазей на гидрофильной основе составили: для 1% и 3% мази через 13,5 ± 1,0 суток, для 5 % мази - 16,0 ± 4,0. Средние сроки заживления ран при использовании мазей на жировой основе были более продолжительными и составили: для 1 % мази - 18,8 ± 2,77, для 3 % - 19,2 ±2,68, и для 5 % -19,6 ± 3,2 суток.

Таким образом, ранозаживляющее действие ЭМАК на жировой основе сопоставимо с действием препарата сравнения Левомеколем, тогда как действие ЭМАК на гидрофильной основе превосходит препарат сравнения Левомеколь. По результатам данного эксперимента установлено, что наилучшим ранозаживляющим действием обладает 1% и 3% мазевая форма ЭМАК на гидрофильной основе.

Клинические испытания фитопрепарата «Эфматол»

Клинические испытания фитопрепарата «Эфматол» (водно-спиртовый раствор эфирного масла почек тополя бальзамического) при лечении ожоговых ран показали, что данный препарат обладает моногонаправленным действием, обеспечивающим выраженный антимикробный, противовоспалительный, иммуномодулирующий и репаративный эффекты, позволившие уменьшить сроки стационарного лечения в 1,7 раза [14].

При лечении ожоговых ран II-IIIА степени рекомендуется использовать 0,5-2% водно-спиртовой раствор «Эфматола», перевязки производит в зависимости от раневого отделяемого до полной эпителизации. При наличии ожогов IIIAБ-IV степени для предупреждения инфицирования струпа рекомендуются ежедневные перевязки с 2% или 5% раствором.

Выводы: Таким образом, результаты доклинических и клинических исследований антимикробной, фунгицидной, антивирусной, противовоспалительной и противотуберкулезной активности эфирных масел растений флоры Казахстана позволяют рекомендовать лекарственные формы на основе изучаемых данных масел в практической фитотерапии и тем самым расширяют ассортимент отечественных лекарственных средств.

Список литературы

  1. Патент РК № 9903 от 15.08.2001 г. Cпособ получения эфирного масла полыни гладкой, обладающее бактерицидной, фунгицидной и антивирусной активостью / Атажанова Г.А., Кулыясов А.Т., Адекенов С.М.
  2. Предварительный патент РК №13409 от 03.07.2003. Способ получения эфирного масла полыни Филатовой (Artemisia filatovae A.N. Kuprianov) / Сулейменов Е.М., Атажанова Г.А., Кулыясов А.Т., Адекенов С.М.
  3. Положительное решение о выдаче предварительного патента РК от 23.02.2007 по заявке №2004/0796.1. от 01.07.04 г. Способ получения эфирного масла живицы сосновой, обладающего высокой антимикробной и фунгицидной активностью in vitro / Садырбеков Д.Т., Танагузова Б.М., Ахметова С.Б., Атажанова Г.А., Адекенов С.М.
  4. Положительное решение о выдаче предварительного патента РК от 21.10.2007 г. По заявке № 2007/0088.1 от 26.01.07 г. Антимикробное и противогрибковое средство / Садырбеков Д.Т., Атажанова Г.А., Смагулов М.К., Ахметова С.Б., Адекенов С.М.
  5. Положительное решение о выдаче предварительного патента РК от 12.06.2006 по заявке №2005/1145.1 от 29.09.05. Средство, обладающее противотуберкулезной активностью в отношении бычьего и птичьего штаммов / Садырбеков Д.Т., Атажанова Г.А., Ахметова С.Б., Смагулов М.К., Адекенов С.М.
  6. Садырбеков Д.Т., Табриз Н.С., Атажанова Г.А., Адекенов С.М. Противотуберкулезная активность эфирных масел флоры Казахстана // В сб.: «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения».- Томск, 2006.- С. 289-290.
  7. ВФС РК № 42-1801-07, РК-ЛС-3-№ 004787 «Эферол».
  8. Инструкция по применению лекарственного средства для специалистов «Эферол», утвержденная приказом Председателя Комитета Фармации Минздрава РК № 139 от 08.08.07.
  9. Сейдахметова Р.Б., Пак Р.Н., Рахимов К.Д., Атажанова Г.А., Адекенов С.М. Эферол – средство для лечения патологии дыхательных путей // В сб. «Фундаментальные проблемы фармакологии». – Москва.- 2003, ч.2. –С. 148.
  10. Сейдахметова Р., Пак Р.Н., Сулейменов Е.М., Бейсембаева А.Б., Атажанова Г.А., Кулыясов А.Т., Адекенов С.М. Химический состав и биологическая активность полыни гладкой // Хим.-фарм. журнал.- 2002.- № 3.- С. 27-30.
  11. Табриз Н.С., Мамыртаева К.И., Атажанова Г.А., Адекенов С.М., Сейдахметова Р.Б. «Эферол» в лечении туберкулеза. // В сб. «Терпеноиды: достижения и перспективы применения в области
  12. ВФС РК № 42-1959-07, РК-ЛС-3-№ 004786 «Дарменин».
  13. Инструкция по применению лекарственного средства для специалистов «Дарменин», утвержденная приказом Председателя Комитета Фармации Минздрава РК № 139 от 22.06.07.
  14. Предпатент РК на изобретение № 15919. Способ лечения ожоговых ран /Баймагамбетов Ш.А., Белан А.С.; опубл. 15.07.2005. Бюл. №7. – С.3.

 

По материалам журнала «Практическая Фитотерапия»,
партнерского издания LIKAR.INFO”.